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如何從微量樣本中提取高質量的殘留DNA?
  殘留DNA樣品制備試劑盒從中提取宿主細胞DNA細胞系中產生的產物,如CHO,大腸桿菌,人類,Vero,畢赤酵母,NS0和MDCK。該試劑盒使用化學裂解和磁珠有效提取基因組來自不同樣品類型的DNA,包括含有高蛋白和低蛋白的樣品DNA濃度。從微量樣本中提取高質量的殘留DNA是一項挑戰,尤其在樣本量極少的情況下。
 

 


以下是一些常見的提取方法和優化策略,可以幫助你提高DNA提取的效率和質量:
 
  1. 選擇合適的提取方法
 
  商用試劑盒:市面上有許多商用DNA提取試劑盒,它們通常已經針對微量樣本進行了優化,使用時能夠更高效地提取DNA。
 
  酚/氯仿法:傳統的酚/氯仿提取法適用于高靈敏度DNA提取,但它可能對微量樣本的提取效果不如現代試劑盒。
 
  磁珠法:磁珠法通過結合磁性珠子高效回收DNA,是目前很多高效提取微量DNA的常用方法,尤其適用于環境樣本和殘留DNA。
 
  2. 優化樣本前處理
 
  樣本預處理:對于來自復雜樣本(如土壤、污水或古代遺骸)的殘留DNA,樣本的預處理步驟至關重要。可以通過研磨、酶解等方式幫助提取更多的DNA。
 
  去除抑制物:殘留DNA中可能包含抑制PCR的物質,如有機物、金屬離子等。使用適當的去污處理步驟(例如乙醇沉淀)有助于去除這些干擾物質。
 
  3. 減少DNA降解
 
  低溫保存:DNA容易在環境中降解,因此提取過程中要盡量保持低溫操作,使用冰浴或低溫離心設備。
 
  避免過度反復凍融:凍融會導致DNA降解,盡量避免反復凍融樣本。
 
  4. 優化DNA純化步驟
 
  增加提取量:在DNA提取過程中,適當增加樣本的處理量或反應體積,有助于提高提取效率。
 
  去除殘留雜質:提取的DNA常常伴隨有RNA、蛋白質或其他有機物,使用DNA純化試劑盒或離心濾膜進一步純化DNA,有助于提高最終的DNA質量。
 
  5. 敏感的檢測和定量
 
  使用熒光染料:如PicoGreen或Qubit DNA定量試劑盒,可以高效地檢測微量DNA的濃度,避免過量的樣本影響實驗結果。
 
  使用qPCR:定量PCR(qPCR)可以檢測提取到的DNA的完整性和質量,確認是否有足夠的DNA用于后續分析。
 
  6. 優化PCR反應
 
  選擇高靈敏度的引物:使用針對微量DNA的特定引物和高效的酶系統(如高保真酶)能夠提高PCR的靈敏度和準確性。
 
  延長PCR反應時間:如果提取的DNA量非常少,可以適當延長PCR反應時間,以提高擴增效果。
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